Dissertation (Metadaten)
Titel:Entwicklung eines Expressionssystems zur Produktion therapeutischer Proteine in filamentösen Hyphenpilzen
 
Autor:Silke Alves
 
URN:NBN:urn:nbn:de:gbv:8-diss-18791
 
Fakultät:Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät
DDC Sachgebiet:660 Technische Chemie
 
Datum der mdl. Prüfung:09.11.2006
 
Referent(in):Prof. Dr. Frank Kempken
Korreferent(en) Korreferentin:Prof. Dr. Ruth Schmitz-Streit
 
Beschreibung:Im Rahmen der Arbeit wurde ein Expressionssystem für den Einsatz in filamentösen Hyphenpilzen entwickelt und angewendet. Anhand ausgewählter Promotoren wurden die heterologen Gene g-csf, igf-I und rnaseI sowie das endogene Gen der RNase N1 in Neurospora crassa exprimiert. Die entstandenen Proteine wurden mit Hilfe einer Signalsequenz ins Kulturmedium sekretiert und des Weiteren untersucht. Mittels Western-Blot-Analysen konnte in den Kulturüberständen ausgewählter Transformanten eine effektive Synthese und Sekretion der RNase A nachgewiesen werden, wobei Konzentrationen von bis zu 1 mg/L Kulturüberstand erreicht wurden. Zur Optimierung der Ausbeuten erfolgte unter anderem Variationen der Kultivierungsbedingungen sowie die Verwendung eines Protease-defizienten Transformationsstammes. Neben der rekombinanten RNase A konnte auch die endogene RNase N1 erfolgreich in N. crassa synthetisiert werden. Dabei zeigten die entsprechenden Transformanten im RNase-Platten-Assay eine deutlich erhöhte Ribonuklease-Aktivität im Gegensatz zu Transformanten, welche die bovine RNase A exprimierten.
 
Schlagworte:Neurospora, Expression
 
Dokumente:
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