Untersuchungen zum Transkriptionsapparat von Plastiden verschiedener Pflanzen unter besonderer Berücksichtigung der Funktion des mit dem eukaryotischen Transkriptionsfaktor TFIIS verwandten ETCHED1-Proteins

Zur Untersuchung des Transkriptionsapparates von Plastiden wurden 'Transkriptionsaktive Chromosomen' (TAC) und eine lösliche sRNAP-Fraktion isoliert. Durch immunologische Analysen konnten in TAC-Fraktionen die Proteine TCP34, das bei der Genregulation und Transkriptstabilisierung involviert sein könnte, und das ETCHED1-Protein nachgewiesen werden. Die Mutation des Gens etched1 ruft in Maispflanzen einen komplexen Phänotyp hervor, der sich durch eine abnormale Entwicklung des Endosperms in den Körnern sowie eine verzögerte Chloroplastenentwicklung in den Blättern auszeichnet. Durch den Vergleich von TAC-Fraktionen aus einer ETCHED1-defizienten Mutante aus Mais mit dem Wildtyp konnte gezeigt werden, dass ETCHED1 als Elongationsfaktor einer RNAP in der TAC-Fraktion agiert, ähnlich wie TFIIS mit der RNAP II im Zellkern. ETCHED1 kann nach Stoppen der Transkription durch den Einbau eines modifizierten Nukleotids die schwache intrinsische Endonukleaseaktivität der TAC-RNAP verstärken und so arretierte Elongationskomplexe reaktivieren. Die Untersuchung der Genspezifität der RNAP in löslichen Extakten zeigte, dass im Vergleich zu TAC-Transkripten ein grundlegend anderes Transkriptionsmuster erhalten, welches wahrscheinlich auf die Aktivität einer nukleär kodierten RNA-Polymerase in dieser Fraktion zurückzuführen ist. Die RNAP-Aktivität in dieser Fraktion wird durch Rifampicin nicht gehemmt, zeigt jedoch eine starke Hemmung in Gegenwart von Tagetitoxin.

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