000K utf8 1100 $c2007 1500 ger 2050 urn:nbn:de:gbv:8-diss-18668 3000 Weingartz, Ute 4000 Exogene Expression von CD70 auf humanen Dendritischen Zellen mittels Elektroporation zur Herstellung einer verbesserten Tumorvakzine$hChristian-Albrechts-Universität zu Kiel [Weingartz, Ute] 4030 Kiel$nChristian-Albrechts-Universität zu Kiel 4209 CD70 gehört neben CD40 zur Gruppe der TNR/TNFR-Ligandenfamilie, die auf maturen Dendritischen Zellen (DC) exprimiert werden. Die CD70-Expression ist streng reguliert und erfolgt nicht auf zytokinmaturierten maturen DC. Es stellte sich die Frage, ob durch die Elektroporation von CD70-mRNA in zytokinmaturierte humanen DC und nachfolgende Kultivierung mit autologen T-Zellen die Induktion einer Th1-Antwort induziert werden kann. Durch sukzessiver Optimierung der Elektroporationsparameter Feldstärke und Pulszeit konnten DC mit einer Transfektionsrate von 73,0% ± 1,3% und einer Viabilität von 83,1% ± 3,9% transfiziert werden. Die Transfektionseffizienz betrug hierbei 33,3% 4,8%. Eine Herunterregulation der Oberflächenmoleküle CD40, CD83, CD86 sowie MHCII auf maturen DC wurde nach Elektroporation nicht beobachtet. Die Blockierung von CD70 mit anti-CD70mAK führte zu einer starken Abnahme der IFN-Sekretion aus autologen CD4-T-Zellen. Die bereits maturierten DC sezernierten nach kognitivem Kontakt zu autologen CD4-T-Zellen die Zytokine IL-12p70 und zu einem größeren Teil IL-10, und waren daher Th2-polarisierend. Erstmals konnte gezeigt werden, dass humane Dendritische Zellen, die mit autologen T-Zellen in Anwesenheit des Antigens SEB kultiviert wurden, bereits nach 24 Stunden und abhängig vom Maturationsgrad der eingesetzten DC im hohen Maße endogenes CD70 exprimieren. Die vorliegende Arbeit unterstreicht den Einfluss von CD70 auf die Th1-Polarisation, und liefert neben einem optimierten Elektroporationsprotokoll zur Antigenbeladung von DC neue Anhaltspunkte für die Entwicklung einer verbesserten DC-basierten Tumorvakzine. 4950 https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:gbv:8-diss-18668$xR$3Volltext$534 4961 https://macau.uni-kiel.de/receive/diss_mods_00001866 5051 610 5550 CD70 5550 Dendritische Zellen 5550 Elektroporation 5550 Feldstärke 5550 Pulszeit 5550 Th1-Polarisation 5550 Transfektionseffizienz 5550 Tumorvakzine