@PhdThesis{diss_mods_00011438, author = {Almasalmeh, Abdulnasser}, title = {Optimierung und Etablierung von Testmethoden und funktionelle Untersuchung verschiedener Aquaporine {\&} Aquaglyceroporine}, year = {2013}, publisher = {Christian-Albrechts-Universit{\"a}t zu Kiel}, address = {Kiel}, keywords = {Aquaporine; stopped flow; Polyole; Wassertransport}, abstract = {Die vorliegende Arbeit behandelte drei Themen: 1) Kl{\"a}rung der umstrittenen Wasserleitf{\"a}higkeit von PfAQP, 2) Ammoniakleitf{\"a}higkeit von Aquaglyceroporinen am Beispiel von hAQP8 und PfAQP und 3) H2O2-Permeabilit{\"a}t von Aquaporinen und Aquaglyceroporinen. Durch den Einsatz verschiedener Polyole (Saccharose, Sorbitol, PEG300 und Glycerol) konnte die Wasserleitf{\"a}higkeit von PfAQP und EcGlpF gekl{\"a}rt werden. EcGlpF, wie viele Aquaglyceroporine, kann Glycerol aber praktisch kein Wasser transportieren. Die Wasserleitf{\"a}higkeit von PfAQP ist von dem eingesetzten Polyol abh{\"a}ngig. In der gro{\ss}en cyclischen Saccharose kann PfAQP sowohl Wasser als auch Glycerol gut leiten. Dagegen hemmt Sorbitol den Wassertransport (IC50 = 0,81 M) und erniedrigt die Glycerolpermeabilit{\"a}t um 80 {\%}. Der Hemmeffekt von Sorbitol beruht nicht auf das Eindringen und Verschlie{\ss}en des Kanals sondern auf die Interaktion mit dem Einm{\"u}ndungsbereich. Glycerol wird durch PfAQP besser transportiert als Harnstoff, auch wenn beide Solute in unterschiedlichen Verh{\"a}ltnissen gemischt sind. Somit trifft die Molenbruch-Anomalie f{\"u}r die Aquaporine unter den herrschenden Testbedingungen nicht zu. Es konnte experimentell ein Protokoll zur Beladung von Hefezellen mit dem pH-sensitiven Fluoresceindiacetat (FDA) etabliert werden, mit dessen Hilfe die Ammoniakleitf{\"a}higkeit von Aquaporinen und Aquaglyceroporinen gemessen werden kann. Damit wurde die Ammoniakpermeabilit{\"a}t von hAQP8 und PfAQP gemessen. Beide Aquaporine erh{\"o}hten die Ammoniakpermeabilit{\"a}t um das drei- bzw. zweifache gegen{\"u}ber den Kontrollzellen. Im letzten Teil wurde die H2O2-Leitf{\"a}higkeit beider AQP-Subfamilien gegen{\"u}bergestellt. Die schnell wasserleitenden Isoformen (hAQP1, rAQP1 und hAQP8) sind in der Lage H2O2 schneller zu transportieren als die glycerolleitenden hAP9 und PfAQP. Die Mutante rAQP1 H180A besitzt eine 4mal gr{\"o}{\ss}ere ar/R-Region als der Wildtyp. Um den gleichen Faktor erh{\"o}hte sich die H2O2-Leitf{\"a}higkeit dieser Mutante. Im Gegensatz dazu verringerte sich die H2O2-Leitf{\"a}higkeit von Mutanten, in denen die ar/R-Region verkleinert wurde wie z. B. hAQP8 I200H und rAQP1 H180F.}, url = {https://macau.uni-kiel.de/receive/diss_mods_00011438}, file = {:https://macau.uni-kiel.de/servlets/MCRFileNodeServlet/dissertation_derivate_00004735/Doktorarbeit.pdf:PDF}, language = {de} }