@PhdThesis{diss_mods_00020897,
  author = 	{Kalbe, Matthias},
  title = 	{Versuch des Nachweises von KI 67-Messenger-RNA in derGaumenmandel mittels In Situ-Reverse TranskriptasepolymeraseKetten Reaktion},
  year = 	{2017},
  publisher = 	{Christian-Albrechts-Universit{\"a}t zu Kiel},
  address = 	{Kiel},
  keywords = 	{in situ; polymerase kettenreaktion; ki 67},
  abstract = 	{Die  in den 1990er Jahren vorgestellte In Situ-(RT)-PCR stellt die Kombination der hochspezifischen In Situ Hybridisierung und der hoch sensitiven Polymerase Kettenreaktion dar. Festgelegte DNA- oder RNA-Abschnitte sollten hierdurch nachgewiesen und im histologischen Schnitt lokalisiert werden k{\"o}nnen. Auch in Material, welches in Paraffin eingebettet und in Formalin fixiert wurde, eines der {\"a}ltesten und am h{\"a}ufigsten angewandten Konservierungsmethoden, sollten Nachweise m{\"o}glich sein.

Im Rahmen dieser Arbeit sollte das Verfahren am Beispiel der Verteilung des Proliferationsgens Ki-67 in der Gaumenmandel erprobt werden. Bekannt war die charakteristische, halbmondf{\"o}rmige Signalverteilung im histologischen Pr{\"a}parat und damit das Ausma{\ss} der Genexpression in den Reaktionszentren der Tonsillenfollikel. 

Aus in Formalin fixierten und in Paraffin eingebetteten Pr{\"a}paraten konnten Intron-{\"u}berspannende mRNA-Abschnitte mit einer Gr{\"o}{\ss}e bis zu 450 Basenpaaren extrahiert und mittels konventioneller RT-PCR dargestellt werden. Durch die Southern Blot-Methode und die In Situ Hybridisierung mit einer Digoxigenin-markierten Sonde konnte die Spezifit{\"a}t des RNA-Nachweises belegt werden. Der Nachweis der Ki-67 spezifischen mRNA mittels In Situ-RT-PCR gelang jedoch nicht. Unterschiedliche Variationen des Verfahrens, Versuche der Prozessoptimierung und Fehlerelimination konnten diesen Umstand nicht {\"a}ndern. Ein positiver Signalnachweis im Zellkern der Lymphozyten wird als unspezifisch gewertet oder ist nur spekulativ zu deuten.

Die hier vorgelegten Ergebnisse deuten darauf hin, dass dieses Verfahren, trotz des urspr{\"u}nglich eingesch{\"a}tzten gewaltigen Potentials, f{\"u}r eine breite Anwendung, wie in der klinischen Diagnostik, nicht geeignet ist.},
  url = 	{https://macau.uni-kiel.de/receive/diss_mods_00020897},
  file = 	{:https://macau.uni-kiel.de/servlets/MCRFileNodeServlet/dissertation_derivate_00007086/in_situ_pcr.pdf:PDF},
  language = 	{de}
}