@PhdThesis{diss_mods_00023897, author = {Klawitter, Jan}, title = {Charakterisierung neuer Substrate der Aspartatprotease Cathepsin D nach Stimulation des TNF-Rezeptors 1}, year = {2018}, publisher = {Christian-Albrechts-Universit{\"a}t zu Kiel}, address = {Kiel}, keywords = {Apoptose; TNFR1; Cathepsin; D HSP90}, abstract = {Apoptose ist durch eine Vielzahl von externen und internen Stimuli ausl{\"o}sbar. Im Bereich externer Stimuli f{\"u}hrt eine Bindung des Liganden Tumornekrosefaktor alpha (TNF) an seinen spezifischen Rezeptor TNFR1 auf der Oberfl{\"a}che von Zellen der U937-Zelllinie zur Rezeptorinternalisierung und weiter zu einer Fusion als Rezeptosom mit dem MVB. Nach Aktivierung spaltet die Aspartatprotease Cathepsin D beispielsweise das mitochondriale Protein bid in seine trunkierte Form tbid. {\"U}ber Cytochrom-c-Freisetzung und sich anschlie{\ss}ende Apoptosombildung wird der intrinsische Weg der Apoptose transduziert. Die Zielsetzung der vorliegenden Arbeit besteht in der Charakterisierung neuer Substrate der Aspartatprotease Cathepsin D. Zellen der humanen histiozyt{\"a}ren U937-Zelllinie wurden nach Vorabeiten an Cathepsin D-defizienten MEF-Zellen exogen mit TNF stimuliert. Dabei zeigte sich f{\"u}r das Hitzeschockprotein HSP90 ein Aufkommen massenspektrometrisch charakterisierter Spaltfragmente. Das Aufkommen dieser Fragmente war nach Anwendung des Aspartatproteaseinhibitors Pepstatin A reversierbar. F{\"u}r das Chaperonin TCP1 alpha wurde eine vollst{\"a}ndige Degradation angenommen, da keine Spaltfragmente entstanden waren. Pepstatin A f{\"u}hrte hier zu keiner signifikanten Inhibition der Degradation. Versuche, die Proteinexpression durch Transfektion von U937-Zellen mit siRNA und shRNA zu inhibieren gelangen nicht. Hierzu wurde abschlie{\ss}end ein CRISPR/Cas9- Plasmid verwendet, wodurch eine stabile Transfektion erm{\"o}glicht werden konnte.}, url = {https://macau.uni-kiel.de/receive/diss_mods_00023897}, file = {:https://macau.uni-kiel.de/servlets/MCRFileNodeServlet/dissertation_derivate_00007898/Dissertation_Klawitter_CTSD.pdf:PDF}, language = {de} }