PT Unknown
AU Klawitter, J
TI Charakterisierung neuer Substrate der Aspartatprotease Cathepsin D nach Stimulation des TNF-Rezeptors 1
PY 2018
PU Christian-Albrechts-Universität zu Kiel
WP https://macau.uni-kiel.de/receive/diss_mods_00023897
LA de
DE Apoptose; TNFR1; Cathepsin; D HSP90
AB Apoptose  ist durch eine Vielzahl  von externen und internen Stimuli auslösbar. Im  Bereich externer Stimuli führt eine Bindung des Liganden Tumornekrosefaktor alpha (TNF) an seinen spezifischen Rezeptor TNFR1 auf der Oberfläche von Zellen der U937-Zelllinie zur Rezeptorinternalisierung und weiter zu einer Fusion als Rezeptosom mit dem MVB. Nach Aktivierung spaltet die Aspartatprotease  Cathepsin D beispielsweise das mitochondriale Protein bid in seine trunkierte Form tbid. Über Cytochrom-c-Freisetzung und  sich anschließende Apoptosombildung wird der intrinsische Weg der Apoptose transduziert. Die Zielsetzung der vorliegenden Arbeit besteht in der Charakterisierung neuer Substrate der Aspartatprotease Cathepsin D.
Zellen der humanen histiozytären U937-Zelllinie wurden nach Vorabeiten an Cathepsin D-defizienten MEF-Zellen exogen mit TNF stimuliert. Dabei zeigte sich für das Hitzeschockprotein HSP90 ein Aufkommen massenspektrometrisch charakterisierter Spaltfragmente. Das Aufkommen dieser Fragmente war nach Anwendung des Aspartatproteaseinhibitors Pepstatin A reversierbar.  Für das Chaperonin TCP1 alpha wurde eine vollständige Degradation angenommen, da keine Spaltfragmente entstanden waren. Pepstatin A führte hier  zu keiner signifikanten Inhibition der Degradation. Versuche, die Proteinexpression durch Transfektion von  U937-Zellen mit siRNA und shRNA zu inhibieren gelangen nicht. Hierzu wurde abschließend ein CRISPR/Cas9- Plasmid verwendet, wodurch eine stabile Transfektion ermöglicht werden konnte.
PI Kiel
ER