@PhdThesis{macau_mods_00000404,
  author = 	{Jagdmann, Sebastian},
  title = 	{Phospholipase D3 (PLD3), biochemische Charakterisierung und Bedeutung bei der Prozessierung des Amyloid-Precursor-Proteins},
  year = 	{2020},
  publisher = 	{Christian-Albrechts-Universit{\"a}t zu Kiel},
  address = 	{Kiel},
  keywords = 	{PLD3; Phospholipase D3; APP; Amyloid-Precursor-Protein; Alzheimer},
  abstract = 	{Zur Analyse der Phospholipase D3 wurden molekularbiologische, zellbiologische und biochemische Methoden eingesetzt. Au{\ss}erdem wurde ein anti-PLD3-Antik{\"o}rper experimentell etabliert, der den kurzen N-Terminus spezifisch detektiert. 

Nach der bisherigen, geringen Studienlage handelt es sich bei der Phospholipase D3 um ein Membranprotein, welches ma{\ss}geblich mit dem Endoplasmatischen Retikulum assoziiert ist (Munck et al. 2005), wobei neuere Studien auf eine Verbindung mit Lysosomen weisen (Palmieri et al. 2011). In dieser Arbeit kann gezeigt werden, dass PLD3 zellul{\"a}r in Endosomen/Lysosomen lokalisiert ist. PLD3 wird proteolytisch in Lysosomen gespalten, wobei N- sowie C-terminale PLD3-Fragmente neu beschrieben werden konnten. Die Phospholipase D3 besteht in vitro {\"u}berwiegend in der l{\"o}slichen, luminalen Form. Weiterhin kann gezeigt werden, dass PLD3 an verschiedenen Positionen der AS-Sequenz mit unterschiedlichen Zuckertypen N-glykosidisch konjugiert ist. PLD3 wird nicht {\"u}ber Mannose-6-Phosphat-Reste sortiert. Auch dem potentiellen N-terminalen Tyrosin-Sortierungsmotiv kommt nur eine untergeordnete Rolle bez{\"u}glich des lysosomalen PLD3-Transportes zu und es werden alternative Transportmechanismen diskutiert.

Zur Analyse einer potentiellen katalytischen Funktion von PLD3 als Phospholipase D wurde ein Enzym-Aktivit{\"a}ts-Assay etabliert, welcher eine m{\"o}gliche pH-Abh{\"a}ngigkeit der Aktivit{\"a}t ber{\"u}cksichtigt. Unter Testbedingungen kann eine enzymatische Aktivit{\"a}t von PLD3 im neutralen Milieu nachgewiesen werden. Die Phospholipase D3 wurde mit dem Retromer-Komplex in Verbindung gebracht (Breusegem und Seaman 2014). Passend kann gezeigt werden, dass PLD3 mit einer essentiellen Untereinheit des Retromer-Komplexes endosomal kolokalisiert, wodurch eine funktionelle Beteiligung der Phospholipase D3 bei der Formierung und Abschn{\"u}rung retrograder Vesikel denkbar ist. 

Durch die PLD3-{\"U}berexpression in neuronalen Zellen k{\"o}nnen die APP-Gesamtlevel teils signifikant reduziert werden, in Zusammenschau mit der Analyse von PLD3-Kockout-Zellen ist der Einfluss auf das APP-Volll{\"a}ngenprotein jedoch als m{\"a}{\ss}ig zu werten. PLD3 hat eher einen Effekt auf die proteolytische Prozessierung von APP, wobei die nicht-amyloidogene Spaltung gef{\"o}rdert und insgesamt geringere zelltoxische Abeta-Mengen generiert werden k{\"o}nnten. Au{\ss}derdem wurde die murine Variante der wichtigsten PLD3-Patientenmutation (PLD3-V232M) mikroskopisch analysiert. Diese zeigt sich unter {\"U}berexpression, abweichend vom Wildtyp, {\"u}berwiegend ER-lokalisiert. Ein pathologischer Transport mit konsekutivem Funktionsverlust von PLD3-V232M k{\"o}nnte eine zellbiologische Erkl{\"a}rung f{\"u}r die beschriebene Assoziation mit der Sp{\"a}tform des M. Alzheimer (Cruchaga et al. 2014) sein.},
  url = 	{https://macau.uni-kiel.de/receive/macau_mods_00000404},
  file = 	{:https://macau.uni-kiel.de/servlets/MCRFileNodeServlet/macau_derivate_00001389/Dissertation_Jagdmann_PLD3.pdf:PDF},
  language = 	{de}
}