Entwicklung eines Expressionssystems zur Produktion therapeutischer Proteine in filamentösen Hyphenpilzen

Alves, Silke

Im Rahmen der Arbeit wurde ein Expressionssystem für den Einsatz in filamentösen Hyphenpilzen entwickelt und angewendet. Anhand ausgewählter Promotoren wurden die heterologen Gene g-csf, igf-I und rnaseI sowie das endogene Gen der RNase N1 in Neurospora crassa exprimiert. Die entstandenen Proteine wurden mit Hilfe einer Signalsequenz ins Kulturmedium sekretiert und des Weiteren untersucht. Mittels Western-Blot-Analysen konnte in den Kulturüberständen ausgewählter Transformanten eine effektive Synthese und Sekretion der RNase A nachgewiesen werden, wobei Konzentrationen von bis zu 1 mg/L Kulturüberstand erreicht wurden. Zur Optimierung der Ausbeuten erfolgte unter anderem Variationen der Kultivierungsbedingungen sowie die Verwendung eines Protease-defizienten Transformationsstammes. Neben der rekombinanten RNase A konnte auch die endogene RNase N1 erfolgreich in N. crassa synthetisiert werden. Dabei zeigten die entsprechenden Transformanten im RNase-Platten-Assay eine deutlich erhöhte Ribonuklease-Aktivität im Gegensatz zu Transformanten, welche die bovine RNase A exprimierten.

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Alves, Silke: Entwicklung eines Expressionssystems zur Produktion therapeutischer Proteine in filamentösen Hyphenpilzen. 2006.

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