Molekularer Nachweis minimaler Resterkrankung bei der akuten lymphatischen Leukämie des Erwachsenen im Graubereich der PCR : Klinische Bedeutung und Optimierung der Methodik durch Einsatz amplikonbasierter Hochdurchsatzsequenzierung und digitaler PCR

Der Nachweis minimaler Resterkrankung (MRD) ist der wichtigste unabhängige prognostische Faktor für die akute lymphatische Leukämie des Erwachsenen. Aktueller Goldstandard zur MRD-Quantifizierung ist die patientenspezifische real-time PCR (RQ-PCR) klonaler Immungenrearrangements, wobei diese Methode eine Limitierung in der spezifischen Quantifizierung im Bereich von <0,01% aufweist.

Das Gesamtkollektiv umfasste 1019 Patienten der GMALL-Studie 07/2003. Bei 178 der 1019 Patienten war eine MRD-basierte Risikostratifizierung nach EuroMRD-Kriterien nicht möglich (molekular nicht evaluierbar).

Für 30 dieser Patienten wurde die droplet digital PCR als Alternative zur RQ-PCR evaluiert. Es gelang die MRD-Quantifizierung mit einer guten Korrelation beider Methoden sowie die exakte Quantifizierung in 14/39 Proben, in denen dies mittels RQ-PCR nicht möglich war.

Mittels Hochdurchsatzsequenzierung (NGS) gelang die Identifikation eines klonalen IGH- und/oder TRB-Genrearrangements als klonalem MRD-Marker in 101/102 Fällen. Eine Untersuchung von Verlaufsmaterial erfolgte für 86 Patienten. 19 Proben waren RQ-PCR negativ, bei unzureichender Assay-Sensitivität, weitere 66 Proben positiv unterhalb des quantitativen Messbereichs sowie 1 Probe niedrig positiv <0,01%.

Mittels NGS wurde in 18/19 Fällen die MRD-Negativität der in der RQ-PCR negativen Proben bestätigt. Bei den niedrig positiven, nicht quantifizierbaren Proben zeigte sich im NGS ein MRD-Nachweis in 40/66 Fällen. MRD konnte auch in der niedrig-positiven Probe nachgewiesen werden. Die Prognose der NGS-MRD-positiven bzw. -negativen Subgruppe entsprach weitgehend jener der Subgruppen der mittels RQ-PCR evaluierbaren Patienten.

Eine NGS-basierte Re-Evaluation von in der RQ-PCR nicht evaluierbaren Proben scheint somit eine optimierte prognostische Aussage zu ermöglichen.

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