Apikale Effekte bei basolateraler Aktivierung des retinalen Pigmentepithels vor dem Hintergrund der altersbedingten Makuladegeneration
Systemische Entzündungssignale stehen im Verdacht, bei der Pathogenese der altersbedingten Makuladegeneration (AMD) eine wichtige Rolle zu spielen. Das Retinale Pigmentepithel (RPE) liegt polarisiert vor und kann Gefahrensignale über Toll-Like-Rezeptoren (TLR) erkennen und pro-inflammatorisch reagieren. Ziel der vorliegenden Arbeit war es, die TLR-2, -3 und -4 auf RPE/Choroidea-Kulturen und primären RPE-Zellen basolateral zu stimulieren und daraufhin die apikale und basale Sekretion von IL-6, IL-1ß und TNFα, den Einfluss auf die Barriere und die Toxizität der apikalen Überstände auf neuronale Zellen zu untersuchen. Dafür wurden RPE/Choroidea-Kulturen und primäre RPE-Zellen aus porcinen Augen präpariert und die RPE/Choroidea-Organkulturen in modifizierten Ussingkammern und die primären RPE-Zellen auf Transwell-Platten kultiviert. Die Zellen wurden basal mit den Agonisten Pam2CSK4 (TLR-2), Polyinosin-/-cytidylsäure (Poly I:C; TLR-3) und Lipopolysaccharid (LPS; TLR-4) für 24 Stunden stimuliert. Die apikalen und basalen Überstände wurden im ELISA auf die Zytokine TNFα, IL-6 und IL-1β untersucht. Die Barrierefunktion wurde durch Transepithelial-Electrical-Resistance (TEER)-Messungen und Immunfluoreszenzfärbungen des Occludins überprüft. Die apikalen Überstände wurden auf SHSY-5Y-Zellen gegeben und die Viabilität im MTT-Assay bestimmt. Die Aktivierung der TLR induzierte in den primären RPE-Zellkulturen eine unpolarisierte Zytokinsekretion, in den Organkulturen hingegen eine polarisierte Zytokinsekretion mit Betonung der basalen Seite. Alle TLR-Agonisten reduzierten den TEER. Occludin zeigte eine signifikante Veränderung der Lokalisation. Die Überstände waren für SHSY-5Y-Zellen nicht neurotoxisch. Diese Daten zeigen einen deutlichen Einfluss von Entzündungsreaktionen auf die Funktion der RPE-Zellen.
Preview
Rights
Use and reproduction:
No license. The provisions of the German Copyright Act (UrhG) apply.
Please note that individual components of the publication may be subject to other licensing or copyright conditions.