Validierung potenzieller neuer Zielgene der kardialen Hypertrophie nach integrierter Analyse der gesamtgenomischen Methylierung und Transkription im Calcineurin- transgenen Mausmodell
Durch systematische Analyse der differentiellen Expression und der DNA-Methylierung von Herzen aus Calcineurin-transgenen Mäusen- als einem klassischen Modell der kardialen Hypertrophie- sowie Wildtypmäusen sollten neue Zielgene in der Modulation der kardialen Hypertrophie identifiziert werden.. Wir konnten in Modellen der kardialen Hypertrophie in vitro und in vivo auf mRNA- Ebene sowie Proteinebene die potentiellen neuen Zielgene Ror2, Leprel1, Vash2, APol6 und Barx2 validieren. Wir konnten zeigen, dass ein Knockdown von Ror2 in vitro einen antihypertrophen Effekt auf die NRVCMs hat. Es wurde nicht nur das zelluläre hypertrophe Genprogramm in Ror2 Knockdownproben runterreguliert, auch die relative Zellgrößenzunahme konnte reduziert werden. Dies wurde nicht nur in Ror2 Knockdownproben gezeigt, sondern auch in Zellen, welche mechanischen und chemischen hypertrophen Stimuli ausgesetzt waren. Es darf angenommen werden, dass ein Ror2 Knockdown den Kardiomyozyten Schutz gegenüber hypertrophieinduzierenden Einflüssen bietet. Außerdem konnten wir aufzeigen, dass ein Ror2 Knockdown eine reflektorische Hochregulation seiner Isoform Ror1 hervorruft.
Nach der grundlegenden Validierung der fünf potentiellen Kandidaten intensivierten wir unsere Versuche mit dem receptor tyrosine kinase like oprhan receptor 2 (Ror2), einem Typ I Transmembranrezeptor der Ror Subfamlie von Zelloberflächenrezeptoren. Nachdem sich Ror2 in verschiedenen in vitro und in vivo Hypertrophiemodellen als hochreguliert präsentierte, generierten wir einen adenoviralen Knockdownvirus.
Des Weiteren zeigten wir, dass die Regulation der Expression von Ror2 auch durch die epigenetische Modifikation der Methylierung erreicht werden kann. Eine Demethylierung führte zu einer vermehrten RNA- Expression von Ror2 und Hochregulation des hypertrophen Genprogramms.
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