Charakterisierung der Proteasen Meprinβ, ADAM10 und ADAM17 im neuronalen SH-SY5Y-Zellsystem im Bezug auf ihre Bedeutung während der neuronalen Differenzierung
In dieser Arbeit werden die Proteasen Meprinβ, ADAM10 und ADAM17 im humanen neuronalen SH-SY5Y-Zellsystem charakterisiert. Zu Beginn wurde die endogene Expression der Proteasen in SH-SY5Y-Zellen per Western Blot-Verfahren erfasst. Mittels Zelloberflächen-Biotinylierung wurden Meprinβ und ADAM10 auf der Zelloberfläche detektiert. Anschließend wurde die proteolytische Oberflächenaktivität von Meprinβ per Aktivitäts-Assay festgestellt. Es wurde nachgewiesen, dass Meprinβ das in der Pathologie der AD bedeutsame APP (Amyloid Precursor Protein) auf der Oberfläche von SH-SY5Y-Zellen spaltet. Mittels ELISA wurde die proteolytische Aktivität von ADAM10 auf der Zelloberfläche erfasst.
Im Folgenden wurden die Versuche in neuronal differenzierten SH-SY5Y-Zellen durchgeführt und um weitere Analysetechniken wie Immunfluoreszenz-Mikroskopie und qRT-PCR ergänzt. Es konnte ein Anstieg der Expression und der proteolytischen Aktivität von Meprinβ und der Protein- und Genexpression der Protease ADAM17 im Differenzierungsprozess beobachtet werden. Des Weiteren wurde eine Abnahme der Proform von ADAM10 und eine Zunahme der aktiven Form und der ADAM10-Aktivität festgestellt.
Zuletzt wurden die Proteasen durch spezifische Inhibitoren im Zellmedium gehemmt, wodurch die Expression neuronaler Markerproteine während der neuronalen Differenzierung messbar beeinflusst wurde. Dies weist auf die Bedeutung der untersuchten Proteasen für die neuronale Differenzierung, die Homöostase und physiologische Funktion neuronaler Zellen hin.
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