Etablierung und Validierung direkter und indirekter Nachweisverfahren zur Diagnostik von Infektionen durch das Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus Type 2
In der Coronavirus-Pandemie war der schnelle und zuverlässige Nachweis von Infektionen durch das severe-acute-respiratory syndrome coronavirus type 2 (SARS-CoV-2) wesentlich. In der vorliegenden Arbeit sollten direkte und indirekte Verfahren für den Nachweis validiert und auf ihre Eignung für die Routinediagnostik untersucht werden. Die Reverse-Transkriptase-Polymerasekettenreaktion (RT-PCR) in Echtzeit ist der Goldstandard für die Akutdiagnostik. In dieser Arbeit wurden zwei In-house-RT-PCRs für den Nachweis des Nukleokapsid- und des Envelope-Protein-Gens von SARS-CoV-2, eines RNA-Bakteriophagen sowie des humanen Glycerinaldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase-Gens unter Verwendung von Uracil-DNA-Glycosylase zur Kontaminationsprävention validiert. Beide Verfahren konnten SARS-CoV-2 sensitiv und spezifisch nachweisen. Das E-Gen-basierte Verfahren war etwas empfindlicher. Die Einbeziehung des zellulären Kontrollgens und des RNA-Phagen stellte den korrekten Ablauf sicher. Die Verfahren eignen sich für unterschiedliche Geräte zur Extraktion und zur Amplifikation. Pools aus acht Patientenproben waren für die PCR-Diagnostik geeigne. SARS-CoV-2-Schnelltests stellen eine wesentliche Ergänzung dar. In dieser Arbeit wurden drei kommerziell erhältliche POCTs untersucht und mit der im Labor entwickelten PCR verglichen. Die untersuchten POCTs konnten COVID-19-Patienten mit einer Viruslast von >107 Kopien/ml gut identifizieren. Der Nachweis SARS-CoV-2-spezifischer Antikörper erlaubt die Diagnostik einer stattgehabten Infektion. In der vorgelegten Arbeit wurden acht vorwiegend IgG-spezifische Antikörpertests verglichen. Es zeigten sich diagnostische Genauigkeiten von 93,7-99,2 %. IgG-Antikörper gegen das S-Protein waren länger nachweisbar als gegen das N-Protein. COVID-19-Infizierte entwickelten nur sporadisch hochavide Antikörper.
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